本方法適用于配合飼料、濃縮飼料、復合預混料飼料、維生素預混合飼料維生素 A 及維生素 D 、維生素 E 的測定。參考標準 GB/T17817-2010 《飼料中維生素 A 的測定 GX 液相色譜法》、 GB/T 17818-2010 《飼料中維生素 D3 的測定 GX 液相色譜法》、 GB/T 17812-2008 《飼料中維生素 E 的測定 GX 液相色譜法》。
1 、方法原理
維生素預混料中的維生素 A 乙酸酯、維生素 D3 、維生素 E （ dl- α - 生育酚乙酸酯）用甲醇溶液提取，試液注入 GX 液相色譜柱，用紫外檢測器在 275 nm 處測定，外標法計算維生素 A 、維生素 D3 、維生素 E （ dl- α - 生育酚乙酸酯）含量。
2 、主要儀器設備
1) 金年会 GX 液相色譜儀 LC901 帶紫外檢測器（ 金年会·(中国)官方网站 ）；
2) 超聲波水浴；
3) 電子天平；
4) 真空抽濾裝置。
3 、實驗方法
1 、混合標樣配置
維生素 A 乙酸酯、維生素 D3 、維生素 E （ dl- α - 生育酚乙酸酯）標準貯備液：準確稱取維生素 A 乙酸酯、維生素 D3 、維生素 E (dl- α - 生育酚乙酸酯 ) 各 10.0 mg ，置于 100 mL 棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，混勻， 4 ℃下保存。該貯備液濃度為 0.1 mg/mL 。
維生素 A 乙酸酯、維生素 D3 、維生素 E （ dl- α - 生育酚乙酸酯）混合標準工作液：準確吸取各標準貯備液若干毫升于 10 mL 棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻。
2 、試樣溶液的制備
稱取試樣 1.00 g 置于 100 mL 棕色容量瓶中，加入約 80 mL 甲醇，于 65 ℃超聲波水浴中超聲提取 30 min ，冷卻至室溫，用甲醇稀釋至刻度，充分搖勻后過 0.45 μ m 濾膜過濾。將試樣溶液進一步稀釋至合適濃度，用于實驗分析。
3 、 金年会 GX 液相色譜儀參考條件
色譜柱： C18 4.6 mm(i.d) × 150mm ；
流動相： 95% 甲醇
流速： 1 mL/min ；
柱溫：室溫
波長： 275 nm ；
測定：取相同體積試樣制備液和標準使用液分別注入 GX 液相色譜儀，根據保留時間按定性，外標峰面積法定量。
4 、實驗結果
4.1 混合標準溶液 GX 液相色譜圖
1. 維生素 A 乙酸酯 2. 維生素 D3 3. 維生素 E
4.2 工作曲線的繪制
維生素 A 乙酸酯工作曲線見下圖，線性相關系數： 0.9998
維生素 D3 工作曲線見下圖，線性相關系數： 0.9998
維生素 E 工作曲線見下圖，線性相關系數： 0.9992
4.3 預混料實際樣品色譜圖
